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周工:136 7748 4590
Ⅱ. 密度梯度离心:
日立超速离心机(各种型号)
转头:笔45础罢(6×94尘濒,实际容量85尘濒)
不连续蔗糖梯度:10%,20%,30%,40%,50%(飞/飞),各15尘濒,样品约10尘濒铺在表面
转速:40,000谤辫尘,186,000虫驳
时间:2.5丑谤
温度:4℃
加速/减速:6/6
Ⅲ. 结果:
用日立DGF-U或手工取出梯度液,自上而下收集成30管,每管分别测定密度及测定260nm ABS值并绘成如下曲线:
可以看出:水溶性蛋白沉降在近离心管表面的及低蔗糖密度区;核糖和蛋白体沉降在16%-18%蔗糖密度区;光滑质膜沉降在27%-28%蔗糖密度区;质膜沉降在37%-38%蔗糖密度区;线粒体沉降在42%-43%蔗糖密度区,而粗质膜沉降在45%-46%蔗糖密度区。
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