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实验室危险物质及处理方法--EBEBEthidium bromide,溴化乙锭

时间:2015年12月22日 信息来源:湘智离心机 字体: 打印此页

溴化乙锭是一种高度灵活的荧光染色剂,用于察看琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用规范302nm 紫外光透射仪激起并放射出橙红色信号,察看琼脂糖凝胶中DNA最常用的办法是应用荧光染料溴化乙锭停止染色,溴化乙锭含有一个能够嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的分离简直没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并经过范德华力与上下碱基互相作用。这个基团的固定位置及其与碱基的亲密接近,招致与DNA分离的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传送给染料,而被分离的染料自身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种状况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有分离DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(0.5ug/ml)时,能够检测到少至10ng的NDA条带。溴化乙锭能够嵌入碱基分子中,招致错配。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!会在60-70度是蒸发(所以最好不要在胶太热的时分加,或者应该加到液体里,0.5ug/ml,染色半小时)(当EB加得过多时,也能够在室温用水将已染色的凝胶浸泡20min以降低未分离的EB惹起的背景荧光)。
    溴化乙锭溶液的净化处置:由于溴化乙锭具有一定的毒性,实验完毕后,应对含EB的溶液停止净化处置再行弃置,以防止污染环境和危害人体安康。

(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处置:
①将贰叠溶液用水稀释至浓度低于0.5尘驳/尘濒;
②参加一倍体积的0.5mol/L KMnO4,混匀,再参加等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时;
③参加一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。

(2)贰叠含量小于0.5尘驳/尘濒的溶液可如下处置:
① 按1mg/ml的量参加活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃



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