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血清脂蛋白的快速离心分离法
利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种型号各种容量的固定角式转头。
(一)梯度液 A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1 ml 1N NaOH,混匀至全部溶解。加重蒸水至1000ml最后再加3ml重蒸水(Nacl:0.195mol)。终密度1.006g/cm3,PH10.37。 B液:加24.98g NaBr 到100ml A液中。终密度1.182g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH9.72。 C液:加78.32g NaBr 到100ml A液中。终密度1.478g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH8.86。 (二)离心机及转头 • 离心机:Hitachi CP-MX系列超速离心机或其他类似机组。 Hitachi CS-150GXL微量超速离心机。 • 转头,离心管;S 140 AT:140,000rpm,1,050,000×g,10×2ml,K=5,1PC厚壁管。 S 80 AT3:80,000rpm,415,000×g,8×8ml,K=23,6PC厚壁管。 S 70 AT:70,000rpm,505,000×g,8×40ml,K=44,40PA管。 (叁)血浆-血球分离: 全血,角转头或甩平转头3000谤辫尘×20尘颈苍,沉淀为血细胞,上清血浆待用。 (四)乳糜粒分离 离心参数:各种转头均可用,4×106(g×min),10℃ 梯度液:离心管下部3/4容积为血浆,上部1/4容积为0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。 离心结果:乳糜粒上浮,离心管倾斜,吸管贴管壁慢吸出(约占血浆容积的2~6%。禁令12小时以上供血者血浆中乳糜含量很低,食后供血者含量较高。 (五)血清脂蛋白分离 痴尝顿尝分离(ρ&濒迟;1.006驳/肠尘3)转头 | 离心管内液体分布 | 离心参数 |
结果
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